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农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法
作者:管理员    发布于:2015-04-13 10:29:58    文字:【】【】【

制备转化用的农杆菌菌液

准备:

1.灭菌 试管 400毫升细长烧杯2瓶,离心瓶4-6个(250ml)。

 

2.试剂:YEP 1200ml(每瓶300ml 共4瓶) Kan 1;1000,Rif1:500。

1/2MS 2%蔗糖(灭菌115度20分钟),Silwet在-20℃贮存。

 

3.步骤:

共转化农杆菌:于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul:10ml接种。28℃,3000rpm摇过夜,约30小时,次日下午6点将已摇活的菌按(1:400)及750ul菌液转至汉300毫升YEP K50 Rif中培养28℃,300rpm约14小时,次日上午8点测OD值,用YEP Rif作为空白对照,当菌液达到OD600为1.5~3.0之内时,可收集菌体于250ml离心瓶(灭菌),4℃,4000g 离心10min 。用10%蔗糖(含0.02%silwet)稀释至OD600 约为0.8-- 1.0左右即,用10%蔗糖作对照。转化时将花在溶液中浸泡50s左右,于弱光下生长。

 

4.浇水:转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透。

 

(注意:选取上述配好的溶液2ml,充分打碎管底部的菌体,在将混匀的菌体溶入600ml溶液中,混匀后再加入Silwet(100%)120ul终浓度为0.02%)。

2.先将浇透水用于转化的苗子的夹全部剪掉,再用宽胶带把花盆的土封好。

3.转化的准备工作:2个400细长烧杯,宽胶带,记号笔,表等。

4.转化过程略,视苗的长势弱 0.8 Pa 3`,长势好的0.8 Pa 5`。

5.标记好,将转化好的苗平放于盒子内,上盖封口膜封好,避光培养24hrs 2天后,将植株立起正常培养,浇水,3天1次。

脚注信息
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